Прво позориште у Ужицу основано је 06. августа 1856. године под називом Театрално друштво. Основано је као део тадашњег Читалишта, прве градске библиотеке, по идеји њеног управитеља Стојадина Обрадовића.
У почетку су се у театру одржавали концерти, хорски наступи, гусларске вечери, играње народних кола и слично, допуњавајући активности саме библиотеке.
Прва представа „Бој на Чачку 1815.“ одиграна је 13. фебруара 1862. године. Репертоар су касније попуниле још три представе „Смрт Стевана Дечанског“, „Ајдуци“ и „Хајдук Вељко“. Представе су се изводиле у кући Милана Каљевића, председника Окружног суда.
Ратни периоди уметност стављају у други план, где позориште губи свој значај и функцију.
10. августа 1945. године основано је професионално Народно позориште у Ужицу. Представа „Госпођа министарка“ премијерно је изведена 04. септембра исте године. Рађена је по тексту Бранислава Нушића, у режији Обрада Недовића. Представе су игране у Соколском дому до 1948. године, када се позориште сели у биоскоп Луксор (познатији као Филкин биоскоп). У новом амбијенту прва представа је била „Ноћ у Глобоком – одрпанци“ Матије Бора, у режији Велимира Живојиновића.
Шездесетих година прошлог века започета је реконструкција градског трга у оквиру које је саграђена нова зграда позоришта. Званично зграда је отворена 1967. године. 01. марта исте године одиграна је епска комедија „Чудна земља“ у режији Миленка Мисајловића и Бранислава Крављанца.
Током свог постојања, Народно позориште у Ужицу стекло је реноме једног од најцењенијих театара у Србији и окружењу. О његовом угледу говори и податак да је прво источно-европско позориште које је отворило Венецијански бијенале.
Од 1996. године Народно позориште организује међународни „Југословенски позоришни фестивал – Без превода“.